ICS 65.020.40 B61 DB51 四 川 省 地 方 标 准 DB 51/T 2632—2019 贝莱斯芽孢杆菌对 核桃炭疽病防控技术规程 2019 - 12 - 17 发布 四川省市场监督管理局 2020 - 01 - 01 实施 发 布 DB51/T 2632—2019 I DB51/T 2632—2019 目 次 前言 ............................................................................... III 1 范围 .............................................................................. 1 2 规范性引用文件 .................................................................... 1 3 术语和定义 ...................................................................... 1 4 生物防控原则 ........................................................................ 2 5 贝莱斯芽孢杆菌液体制剂制备方法 ...................................................... 3 6 贝莱斯芽孢杆菌制剂剂型、有效含量及保存方法 .......................................... 3 7 防控技术 ............................................................................ 3 8 注意事项 ............................................................................ 3 附录 A（资料性附录） 贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）对核桃炭疽病的防效 ........ 5 II DB51/T 2632—2019 前 言 本标准按GB/T1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的规则起草。 本标准由四川省林业和草原局提出并归口。 本标准由四川省市场监督管理局批准。 本标准主要起草单位：西华师范大学 四川省林业科学研究院 四川农业大学 会理县林业和草原局 本标准主要起草人：杨莉 李丕军 朱天辉 邢文曦 李正武 III DB51/T 2632—2019 贝莱斯芽孢杆菌对核桃炭疽病防控技术规程 1 范围 本标准规定了贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）制剂防治核桃炭疽病（walnut anthracnose）的 一般原则和技术要求。 本标准适用于四川省核桃炭疽病的生物防治。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB 20287-2006 农用微生物菌剂 NY/T 1114-2006 微生物肥料实验用培养基技术条件 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 核桃炭疽病 walnut anthracnose 核桃最重要的病害之一，主要危害核桃果实，产生黑褐色稍凹陷、圆形或不规则形病斑，严重时使 全果腐烂，干缩脱落。 3.2 核桃炭疽病病菌 Colletotrichum gloeosporioides 核桃炭疽病病菌学名为 Colletotrichum gloeosporioides。隶属半知菌亚门（Deuteromycotina），腔孢 纲（Coelomycetes） ，炭疽菌属（Colletotrichum）。该真菌分布广、寄主多，常危害植物叶、花、果、茎 及嫩枝，造成叶斑、叶枯、花腐、果腐、枝枯等症状，影响植物生长发育。该真菌感染核桃，主要引起 核桃果实发生炭疽病，使核桃果实发生腐烂，导致提前落果。 3.3 1 DB51/T 2632—2019 贝莱斯芽孢杆菌 Bacillus velezensis 隶属厚壁菌门 （Firmicutes） ，芽孢杆菌纲（Bacilli），芽孢杆菌目（Bacillales），芽孢杆菌科（Bacillaceae）， 芽孢杆菌属（Bacillus）细菌。该菌株由四川省林业科学研究院森林病虫害防治研究所分离获得。 3.4 植物病害生物防治 Biocontrol of plant diseases 指利用有益微生物和生物代谢产物对植物病害进行有效防范和治疗。 3.5 一级斜面种子 Primary bevel seed culture 处于休眠状态的菌种，经过斜面活化后，成长为能够迅速生长为合格菌体的菌种。 3.6 二级液体种子 Secondary liquid seed culture 一级斜面种子接入到有培养液的三角瓶中，经培养得到大量菌体。 3.7 液体发酵 Liquid fermentation 把二级液体种子接入到有培养液的体积较大的三角瓶中进行发酵。 3.8 发病率 Incidence 发病林地、植株和器官等发病的百分率，发病率=病株数/总株数×100%。 3.9 病情指数 Disease index 全面考虑发病率与严重度的综合指标，病情指数=100×∑（各病级果实数×各级代表值）/(调查总果 实数×最高级代表值)。 3.10 防治效果 Control effect 防治效果=（对照病情指数-处理病情指数）/ 对照病情指数×100%。 4 生物防控原则 2 DB51/T 2632—2019 应遵循“预防为主，防治结合”的原则。减少因施用化学农药而造成病原菌抗药性的增强，以及给 人们的身体健康和生态环境带来严重伤害。 5 贝莱斯芽孢杆菌液体制剂制备方法 5.1 一级斜面种子制备 按常规方法制作牛肉膏蛋白胨斜面培养基，接种贝莱斯芽孢杆菌后培养成一级斜面种子。 5.2 二级液体种子制备 采用营养肉质培养液经高压灭菌后，按100 mL液体盛于300 mL三角瓶比例（通氧控制）装瓶，在 无菌状态接种上述一级斜面种子，每瓶接种2支斜面种子培养成贝莱斯芽孢杆菌二级液体种子。 5.3 液体发酵 采用营养肉质培养液经高压灭菌后，按 200 mL 液体盛于 500 mL 三角瓶比例（通氧控制）装瓶， 在无菌状态接种上述二级液体种子，接种量 10% (体积比)，30℃，180 r/min 培养成贝莱斯芽孢杆菌液 体制剂。 6 贝莱斯芽孢杆菌制剂剂型、有效含量及保存方法 贝莱斯芽孢杆菌制剂剂型为悬浮剂；有效成份为芽孢，含量为 1×109 cfu/mL。 瓶装制剂贮存于阴凉、干燥处，室温保存半年或低温（4℃）1 年半不影响治疗效果。 7 防控技术 7.1 防治时间及频率 核桃炭疽病以预防为主。在桃树开花后第三周开始施药，每隔15天喷施一次，共7次。防治效果见 附录A。 7.2 防治方法 使用背负式电动喷雾器，确保药液均匀覆盖全株果叶，喷液量以均匀喷湿叶片正反面、核桃果实表 面、有药液下滴为度。结果资料可参考附录A。 8 注意事项 不能与链霉素等抗生素混用。 不可与碱性的农药等物质混合使用。 使用本品时应穿戴防护服和手套，避免吸入药液。施药期间不能吃东西和饮水；施药后应及时洗手 和洗脸。 避免孕妇和哺乳期妇女接触。 3 DB51/T 2632—2019 禁止在河塘等水域内清洗施药用具。防止药液污染水源地。 属生物类农药，注意防晒、防霉、防腐，不得与食品和日用品一起运输和贮存。 应选择阴天或午后使用，若药后下雨应在雨停后再次喷施或涂抹，按照实际病害严重度选择浓度及 用量。 4 DB51/T 2632—2019 AA 附 录 A （资料性附录） 贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis）对核桃炭疽病的防效 制剂浓度（活体与代谢物混合剂） 发病率% 病情指数 防治效果% 稀释1000倍 24 28.38 71.62 稀释800倍 11 20.24 79.76 稀释600倍 9 18.68 81.32 稀释400倍 7 13.45 86.55 稀释200倍 5 10.55 89.45 未处理 38 51.60 — _________________________________ 5