ICS 65.020.20 B 05 DB21 辽 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 3239—2020 腐植酸含量快速检测技术规程 Technical specification for rapid detection of humic acid content 2020 - 03 - 30 发布 辽宁省市场监督管理局 2020 - 04 - 30 实施 发 布 DB21/T 3239—2020 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则编写。 本标准由辽宁省农业农村厅提出并归口管理。 本标准起草单位：辽宁省农业科学院、辽宁顺屹农业科技有限公司。 本标准起草人：郝晓莉、陈芳、张馨予、李丽娜、卜庆状、詹德江、王在亮、邢华、李晴晴、郭书 立、郝明。 本标准发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈， 我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。 归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024-23447862 标准起草单位通讯地址：辽宁省沈阳市沈河区东陵84号，联系电话：024-31029902 1 DB21/T 3239—2020 腐植酸含量快速检测技术规程 1. 范围 本标准规定了矿物源总腐植酸、可溶性腐植酸、游离腐植酸的快速测定方法。 本标准适用于矿物源腐植酸原料（风化煤、褐煤和泥炭）中总腐植酸、游离腐植酸含量和腐植酸盐 制品中的可溶性腐植酸含量的快速测定。 2. 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8170 数值修约规则与极限数值的表示和判定 HG/T 2843 化肥产品 化学分析常用标准滴定溶液、标准溶液、试剂溶液和指示剂溶液 GB/T 34766 矿物源总腐植酸的测定 GB/T 35106 矿物源游离腐植酸含量的测定 GB/T 35107 矿物源腐植酸肥料中可溶性腐植酸的测定 3. 试剂和材料 3.1 实验用水 本标准所用水应符合 GB/T 6682 中三级水的规定。 3.2 试剂 所用试剂及溶液的配制，在未注明规格和配制方法时，除非另有说明，均指分析纯试剂。实验中所 使用的标准溶液，按HG/T 2843规定制备。 1. 2. 2 DB21/T 3239—2020 3. 3.1. 3.2. 3.2.1. 硫酸（H2SO4），ρ=1.84 g/mL 3.2.2. 硫酸溶液，c（H2SO4）=0.5 mol/L 量取2.70 mL浓硫酸，沿烧杯壁缓缓加入水中，不断搅拌，冷却至室温后定容至100 mL。 3.2.3. 硫酸溶液，c（H2SO4）=0.05 mol/L 量取2.70 mL浓硫酸，沿烧杯壁缓缓加入水中，不断搅拌，冷却至室温后定容至1000 mL。 3.2.4. 焦磷酸钠碱液(Na4P2O7·lOH20) 称取15 g焦磷酸钠和7 g氢氧化钠溶于适量水中，将溶液转入1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度， 摇匀。 3.2.5. 氢氧化钠溶液{w [NaOH]＝1 %} 称取10 g氢氧化钠溶于适量水中，冷却至室温后转移至1 000 mL的容量瓶中，定容至刻度，摇匀， 储存于塑料瓶中。注意密封、避光存放，两个月内用完。 3.2.6. 重铬酸钾溶液，c（1/6 K2Cr2O7）=1 mol/L 取重铬酸钾49 g置于1L烧杯中，加入600 mL～800 mL水，不断搅拌（必要时可加热溶解），待其完 全溶解，当溶液处于室温时，转移到1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。 3.2.7. 有机碳标准溶液，c（C）=5.000 g/L 称取105 ℃烘干2 h的苯甲酸钠（C6H5CO2Na，分析纯）8.5714g（准确至0.1mg）加水溶解后，用水 定容到1L，此溶液需现用现配。 4. 仪器 4.1 紫外-可见分光光度计 4.2 分析天平：感量 0.0 1 g，感量 0.000 1 g。 4.3 离心机：转速 3000rpm 转/分以上。 3 DB21/T 3239—2020 5. 标准曲线 分别吸取有机碳标准溶液（4.7）0 mL、0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL 至 50 mL 玻璃试管中，加水补至 2.5 mL，相应碳含量分别为 0 mg、2.5 mg、5.0 mg、7.5 mg、10.0 mg、12.5 mg。向试管中准确加入 5 mL 重铬酸钾溶液（4.6），然后沿管壁缓慢加入 8 mL 硫酸（4. 1），避 免溅出，摇匀（此过程激烈放热，注意实验安全）。将试管置于 100±2 ℃恒温箱中，加热氧化 90 min 后将试管取出，放入冷水中冷却至室温，将试管内液体全部转移至 50 ml 容量瓶中，定容、摇 匀。在 590 nm 波长处测定吸光度值，以测出的吸光度值对碳含量绘制标准曲线。 6. 总腐植酸的测定 1. 2. 3. 4. 5. 6. 6.1 方法原理 采用焦磷酸钠碱液提取含矿物源腐植酸样品中的总腐植酸，得到提取液，在酸性条件下沉淀，分离 除去非腐植酸的可溶性物质，在强酸条件下，用重铬酸钾氧化提取的总腐植酸，在590 nm的波长处产生 最强吸光度值，用苯甲酸钠标准溶液配制标准曲线，查找出对应样品在标准曲线上的碳含量值，其结果 用总腐植酸碳含量表示。 4. 5. 6. 4 DB21/T 3239—2020 7. 8. 9. 10. 10.1. 6.2 分析步骤 6.2.1 试样制备 试样经多次缩分后，取出200 g，将其粉碎（研磨）全部通过80目标准筛，置于干燥样品瓶中，备 用。 6.2.2 提取 称取试样1.0 g（精确至0.0 1 g）于300 mL锥形瓶中，加入70 mL焦磷酸钠碱液（4.4），摇动使样 品润湿，于锥形瓶口加小漏斗，沸水浴中加热30 min，期间摇动3～4次。取出锥形瓶，冷却后平均转移 至两只50 mL塑料离心管中离心分离，离心速度为3000 r/min，离心时间为10 min，将离心后的上清 液合并转移至250 mL容量瓶中，然后用水分多次洗涤锥形瓶中残渣至离心管中，对沉淀物进行洗涤离心, 至可溶物萃取率大于98%（固液体积比=1：10，洗涤两次，每次洗涤要将沉淀物摇匀），合并上清液于 250 mL容量瓶中，加水定容，备用。 6.2.3 沉淀 吸取上述容量瓶中试样液体 10 mL（样品碳含量大于 30%，可根据样品含量适当减少吸取量）至 25 mL 玻璃离心管中,加入 0.5 mol/L 硫酸溶液（4.2）4 mL 酸化，混匀后静置 10 min，离心速度 3000 r/min， 离心时间 10 min，弃去上清液。用 0.05 mol/L 的硫酸溶液（4.3）分多次洗涤沉淀、离心后弃去上清 液，保留沉淀，至可溶物萃取率大于 98%（固液体积比=1：10，洗涤两次，每次洗涤要将沉淀物摇匀）。 6.2.4 测定 加入 5 mL 重铬酸钾溶液（4.6）至上述玻璃离心管中，然后沿管壁缓慢加入 8 mL 硫酸（4.1），避 免溅出，摇匀（此过程激烈放热，注意实验安全）。将玻璃离心管置于 100±2℃恒温箱中，90 min 后 5 DB21/T 3239—2020 将离心管取出，放入冷水中冷却至室温，将玻璃离心管内液体全部转移至 50 ml 容量瓶中，定容、摇匀。 在 590 nm 波长处测定吸光度值。根据标准曲线获得样品的碳含量值。除不加试样外，使用同样的试剂， 进行空白试验。 7. 可溶性腐植酸的测定 7.1 方法原理 用蒸馏水提取含矿物源腐植酸样品中的可溶性腐植酸，得到提取液，在酸性条件下沉淀，分离除去 非腐植酸的可溶性物质，在强酸条件下，用重铬酸钾氧化提取的可溶性腐植酸，在 590 nm 的波长处产 生最强吸光度值，用苯甲酸钠标准溶液配制标准曲线，查找出对应样品在标准曲线上的碳含量值，其结 果用可溶性腐植酸碳含量表示。 7.2 分析步骤 7.2.1 试样制备 按 6.2.1 操作。 7.2.2 提取 除提取剂采用蒸馏水之外，其他过程按6.2.2操作。 7.2.3 沉淀 吸取上述容量瓶中试样液体 10 mL（样品碳含量大于 30%，可根据样品含量适当减少吸取量）至 25 mL 玻璃离心管中,加入 2 mL 0.5 mol/L 硫酸溶液（4.2）酸化，混匀后静置 10 min，离心速度 3000 r/min， 离心时间 10 min，弃去上清液。用 0.05 mol/L 的硫酸溶液（4.3）分多次洗涤沉淀、离心后弃去上清 液，保留沉淀，至可溶物萃取率大于 98%（固液体积比=1：10，洗涤两次，每次洗涤要将沉淀物摇匀）。 7.2.4 测定 按 6.2.4 操作。 8. 游离腐殖酸的测定 6 DB21/T 3239—2020 8.1 方法原理 采用稀碱溶液提取含矿物源腐植酸样品中的游离腐植酸，得到提取液，在酸性条件下沉淀，分离除 去非腐植酸的可溶性物质，在强酸条件下，用重铬酸钾氧化提取的可溶性腐植酸，在 590 nm 的波长处 产生最强吸光度值，用苯甲酸钠标准溶液配制标准曲线，查找出对应样品在标准曲线上的碳含量值，其 结果用可溶性腐植酸碳含量表示。 8.2 分析步骤 8.2.1 试样制备 按6.2.1操作。 8.2.2 提取 除了提取剂采用氢氧化钠溶液（4.5）之外，其他过程按6.2.2操作。 8.2.3 沉淀 吸取上述容量瓶中试样液体 10 mL（样品碳含量大于 30%，可根据样品含量适当减少吸取量）至 25 mL 玻璃离心管中,加入 5 mL 0.5 mol/L 硫酸溶液（4.2）酸化，混匀后静置 10 min，离心速度 3000 r/min， 离心时间 10 min，弃去上清液。用 0.05 mol/L 的硫酸溶液（4.3）分多次洗涤沉淀、离心后弃去上清 液，保留沉淀，至可溶物萃取率大于 98%（固液体积比=1：10，洗涤两次，每次洗涤要将沉淀物摇匀）。 8.2.4 测定 按 6.2.4 操作。 9. 结果计算和表述 分析样品中总腐植酸、可溶性腐植酸、游离腐植酸碳的质量分数 w，数值以 %表示，按以下公式计 算。 7 DB21/T 3239—2020 式中： w — 总腐植酸、可溶性腐植酸、游离腐植酸碳的质量分数，单位为 % ； c — 由标准曲线查得或回归方程算得试样测定液中碳的质量，单位为毫克（mg）； m — 试样的质量，单位为克（g）； D — 分取倍数，试样定容体积与分取体积之比； 1000 — 将 mg 换