ICS 65.020.30 CCS B 40 团体 标准 T/SHZSAQS 00161—2022 生鲜乳中金黄色葡萄球菌的定量检测 2022-11-09发布 2022-11-09实施 石河子市质量标准化协会 发布 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00161—2022 I 目 次 前言 ................................ ................................ ................ II 1 范围 ................................ ................................ .............. 1 2 规范性引用文件 ................................ ................................ .... 1 3 术语和定义 ................................ ................................ ........ 1 3.1金黄色葡萄球菌 ................................ ................................ .... 1 3.2实时定量聚合酶链反应 ................................ .............................. 1 3.3引物 ................................ ................................ .............. 1 3.4模板 ................................ ................................ .............. 1 3.5其它 ................................ ................................ .............. 2 4 仪器设备和试剂 ................................ ................................ .... 2 4.1仪器和设备 ................................ ................................ ........ 2 4.2试剂 ................................ ................................ .............. 2 5 鉴定金黄色葡萄球菌引物与探针说明 ................................ .................. 2 5.1扩增基因 ................................ ................................ .......... 2 5.2扩增引物 ................................ ................................ .......... 2 5.3引物使用说明 ................................ ................................ ...... 2 5.4探针说明 ................................ ................................ .......... 2 5.5目的片段 ................................ ................................ .......... 3 5.6质控质粒 ................................ ................................ .......... 3 6 实验方法 ................................ ................................ .......... 3 6.1样品准备 ................................ ................................ .......... 3 6.2模板制备 ................................ ................................ .......... 3 6.3检验步骤 ................................ ................................ .......... 3 7 结果判定 ................................ ................................ .......... 4 8 人员防护 ................................ ................................ .......... 4 9 注意事项 ................................ ................................ .......... 4 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00161—2022 II 前 言 本文件参照 GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则 》给出 的规则起草。 本文件起草单位： 石河子大学动物科技学院、新疆生产建设兵团 第八师畜牧兽医工作站 。 本文件主要起草人 ：张辉、王震、邓兴梅、刘荣慧、周霞、王勇、 吴洁、刘良波、孙志华、 张豫、何开兵、张静、郭嘉、赵天艺、何白雪、张梦琦 。 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00161—2022 1 生鲜乳中金黄色葡萄球菌 的定量检测 1 范围 本文件规定了生鲜乳中金黄色葡萄球菌定量检测的术语与定义及仪器设备和试剂、鉴 定金黄色葡萄球菌引物与探针说明、实验方法、结果判定、人员防护、注意事项 等。适用 于生鲜乳中金黄色葡萄球菌 的定量检测 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版 本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB19489 实验室生物安全通用要求 GB/T27401 实验室质量控制规范 NY/T541 动物疫病实验室检验采样方法 YY/T1173 聚合酶链反应分析仪 JJF1527 聚合酶链反应分析仪校准规范 3 术语和定义 3.1金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌属革兰氏阳性菌，不含芽胞和鞭毛，是微球菌科葡萄球菌属细菌 。在 显微镜下呈葡萄串状。 3.2 实时定量聚合酶链反应 实时荧光定量 PCR（Quantitative Real -time PCR ）是一种在 DNA扩增反应中，以荧光化 学物质测每次 聚合酶链式反应 （PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待 测样品中的特定 DNA序列进行定量分析的方法。 3.3 引物 应用化学方法合成一对与已知扩增基因片段两侧 DNA序列互补的寡核苷酸，作为 PCR 扩增的片段。 3.4 模板 全国团体标准信息平台 T/SHZSAQS 00161—2022 2 待扩增的靶 DNA。 3.5 其它 实时荧光定量 PCR操作、校准方法均参考 YY/T1173 聚合酶链反应分析仪和 JJF1527-201 聚合酶链反应分析仪校准规范。 4 仪器设备和试剂 4.1仪器和设备 （1）灭菌处理器具 :1.5mL离心管， 0.2mL实时荧光定量 PCR八联管，微量移液器 Tip头。 （2）实时荧光定量 PCR仪器 （3）微量离心机 （4）可调微量移液器（ 10μL～1000μL） （5）微量蛋白 -核酸检测仪 4.2 试剂 （1）除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂 ,水为灭菌双蒸水。 （2）基因组 DNA提取试剂盒 （3）AceQ Universal U+ Probe Master Mix V2 。 5 鉴定金黄色葡萄球菌引物与 探针说明 5.1 扩增基因 金黄色葡萄球 EbpS基因（GenBank:U48826.2 ）。 5.2扩增引物 EbpS-F: TTCTGGCAAGGTGAATAACTCGAC EbpS-R: GCACTATTACTTGCTGCGCCT EbpS-Probe: TCGGTGCTGGAACAGCAGGTTTGGCT 5.3引物使用说明 引物EbpS-F、E