ICS 65.020.30 CCS B44 15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2530—2022 奶牛产后子宫内膜炎早期诊断技术规范 Technical rules for early diagnosis of postpartum endometritis in dairy cows 2022-03-25 发布 2022-04-25 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发 布 DB15/T 2530—2022 前  言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院、宁夏大学、西北农林科技大学、鄂尔多斯市农牧业 综合行政执法大队。 本文件主要起草人员：张春华、宝华、特日格勒、马燕芬、羿静、宋利文、毕力格巴图、萨初拉、 王海明、赵濛、刘瑞芳、王超、七十三、谷英。 I DB15/T 2530—2022 奶牛产后子宫内膜炎早期诊断技术规范 1 范围 本文件规定了奶牛产后子宫内膜炎的术语和定义、临床表现、检测方法和判定标准。 本文件适用于奶牛场以及畜牧工作者对奶牛产后子宫内膜炎的判定。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 产后奶牛 postpartum cows 从分娩到胎衣排出的奶牛。 子宫内膜炎 endometritis 奶牛分娩和助产时由于产道受损、胎衣不下、子宫脱垂、流产、子宫复旧不全导致细菌感染而引起 的常见产科疾病。 干扰素-γ interferon γ 体内重要的细胞因子，通过调控免疫相关基因的转录协调机体的免疫反应，在诱导抗病毒反应、细 胞凋亡、抑制细胞增殖及免疫调节等方面具有重要的生物学作用。 4 临床表现 慢性子宫内膜炎，病牛全身症状不明显，从子宫流出透明的或带有絮状物的渗出物。 急性子宫内膜炎，病牛食欲不振，泌乳量降低，弓背努责，常作排尿姿势，从阴道排出粘液性或 污红色恶臭的渗出物，卧地时流出的量更多。 急性子宫内膜炎严重时，病牛体温升高，精神沉郁，食欲下降及产奶量明显下降，反刍减少。 5 诊断方法 1 DB15/T 2530—2022 诊断装置和诊断试剂 5.1.1 电子显微镜、超声影像仪、酶标仪（比色波长 550 nm）、水浴箱（孵育温度为 37 ℃）、台式 离心机、滴管、冰醋酸（AR 级，乙酸含量 99 %以上）、子宫内膜冲洗装置。 5.1.2 IL-2 ELISA 试剂盒、IFN-γ ELISA 试剂盒、载玻片、盖玻片、精密 pH 试纸。 5.1.3 95 %酒精、硝酸、33 %氢氧化钠、5 %硝酸银、吉姆萨染液、NO 抗体、IL-2 抗体和 IFN-γ抗体。 样品采集 采集产犊后1～10 d内任何一天的奶牛血液10 mL、子宫颈粘液10 mL、恶露10 mL。 测定指标 NO、IL-2和IFN-γ。 测定步骤 5.4.1 子宫颈粘液中白细胞数量判定 滴 1 滴发情奶牛子宫颈口粘液于载玻片上，同时滴 1 滴 95 %的乙醇加以固定。 滴 1 滴吉姆萨于载玻片上进行染色。 采用油镜检查5个视野后，对其100个细胞进行计数，计算白细胞总数。 5.4.2 恶露颜色判定 滴加 0.5 mL 硝酸于 2 mL 子宫内膜炎的恶露中，于沸水中煮沸 1 min～2 min，取出冷却后，加入 1.5 mL 33 %的氢氧化钠溶液，混匀后观察颜色变化。 滴1滴恶露于精密pH试纸上，观察pH试纸变化情况。 5.4.3 血清 NO 测定 将奶牛血清与酶标板在37 ℃孵育90 min，洗板5次；加入抗牛NO抗体液孵育60 min，洗板5次；加 入预热后的ABC工作液孵育30 min，洗板5次；加入TMB显色液孵育30 min，加入TMB反应终止液；在酶标 仪550 nm处测吸光度值。根据标准曲线，计算得出血清中NO含量。 5.4.4 血清 IL-2 测定 将奶牛血清与酶标板在37 ℃孵育90 min，洗板5次；加入抗牛IL-2抗体液孵育60 min，洗板5次； 加入预热后的ABC工作液孵育30 min，洗板5次；加入TMB显色液孵育30 min，加入TMB反应终止液；在酶 标仪450 nm处测吸光度值。根据标准曲线，计算得出血清中IL-2含量。 5.4.5 血清 IFN-γ测定 将奶牛血清与酶标板在37 ℃孵育90 min，洗板5次；加入抗牛IFN-γ抗体液孵育60 min，洗板5次； 加入预热后的ABC工作液孵育30 min，洗板5次；加入TMB显色液孵育30 min，加入TMB反应终止液；在酶 标仪450 nm处测吸光度值。根据标准曲线，计算得出血清中IFN-γ含量。 6 判定标准 子宫分泌物性状判定 2 DB15/T 2530—2022 奶牛子宫分泌物性状判定见表1。 表1 奶牛子宫分泌物性状判定 症状描述 判定 无分泌物或清亮透明分泌物 健康 黏液中有白色不透明物质或含有脓斑点 轻度子宫炎 黏脓性物质分泌物（≦50%脓性分泌物）并有恶臭味 中度子宫炎 黏脓性物质分泌物（≧50%脓性分泌物）并有恶臭味 中度子宫炎 子宫颈粘液中白细胞数量判定 奶牛子宫颈口粘液中的白细胞数量判定见表2。 表2 奶牛子宫颈口粘液中的白细胞数量判定 白细胞数量 判定标准 < 10 阴性 10～30 亚临床型 31～80 临床型 81～150 急性 恶露颜色判定 若恶露液体颜色变为黄绿色、琥珀色或者橙色，则判定奶牛患有子宫内膜炎；若恶露液体颜 色为无色则判定为阴性。 若恶露pH为7.5～8.5，则判定奶牛患有子宫内膜炎；若恶露pH低于7，则判定为阴性。 超声影像判定 若超声图像显示子宫腔轮廓模糊不清，所在区域不产生回声或回声减弱，可判定奶牛患有子 宫内膜炎；若超声图像显示子宫壁清晰，子宫体积增大，宫腔内有大量脓液，可判定奶牛患有严 重子宫内膜炎；若超声图像显示子宫内呈白色，子宫肌层与其它组织界限明显，轮廓清晰，可判 定奶牛为健康奶牛。 血清指标判定 根据产犊后奶牛发病特点、临床症状可对泌乳早期奶牛作出初步诊断，通过测定血清中NO、IL-2和 IFN-γ含量予以确诊，当NO、IL-2和IFN-γ3项指标均超标时即可判定奶牛患有子宫内膜炎。泌乳早期 奶牛子宫内膜炎判定按照表3进行。 3 DB15/T 2530—2022 表3 泌乳早期奶牛子宫内膜炎判定值 4 血清中测定指标 判定标准 NO (μmol/L) ≥ 14 IL-2 (pg/mL) ≥ 120 IFN-γ (pg/mL) ≥ 150